Схема лечения лейкоза кошек
Лейкемия кошек проявляется в основном развитием лейкемии с образованием лимфом и фибросарком в результате вирусной трансформации лимфоретикулярных и, реже, гематопоэтических клеток. Заболевание является следствием иммуносупрессии и всегда протекает прогрессивно, то есть без обратного развития. Возбудитель ЛК относится к ретровирусам и, в частности, к экзогенным онкорнавирусам кошек. Вирус ЛК широко распространен в популяции кошек и может передаваться горизонтально.
В мире инфицированы приблизительно 5—10% кошек. Главным источником распространения вируса является инфицированная слюна, в 1 мл которой может содержаться 5х10 3 —2х10 6 вирусных частиц. Более половины инфицированных кошек погибают от вторичных инфекций, в результате иммунодефицита, а не от неопластической болезни. Основная масса (85%) инфицированных кошек погибают в возрасте 3,5 лет. Поражая гемолимфо-ретикулярные клетки, вирус часто вызывает форму СПИД кошек. Обработка культуры клеток костного мозга больных животных кортикостероидами ведет к реактивации латентной инфекции.
Вирусы лейкемии кошек подразделяют на 3 субгруппы: А, В и С. Вирус субгруппы А является экотропным прототипным вирусом, передающимся горизонтально, и связан с длительно латентно-развивающейся лимфомой. Вирусы субгруппы В и С всегда присутствуют в ассоциации с вирусом ЛК-А (соответственно в 50 и 1% случаев). Субгруппа ВЛК-В является генетическими рекомбинантами гена env ВЛК-А и эндогенных провирусных элементов. Эндогенный ВЛК, хотя подобен ВЛК-А по структуре генома, но никогда не экспедировался как инфекционный вирус. ВЛК-С в сочетании с ВЛК-А вызывает летальную анемию, подобную эритроциторной аплазии человека.
Как и все ретровирусы типа С, вирус лейкемии кошек состоит из трех структурных единиц: нуклеокапсида, сердцевины и оболочки. Нуклеокапсид представлен двумя молекулами (+) оцРНК и тремя кодированными gag-геном белками: р10, р15С и р27. Три белка формируют оболочку, окружающую нуклеопротеин (РНК и несколько копий ревертазы). Оболочка нуклеокапсида затем окружается кислым белком р12, кодируемым также gag-геном. Оболочка вириона, образованная мембраной клетки при почковании вириона, содержит два env-генных продукта: gp70 в качестве основного и gpl5E в качестве минорного компонента. Gpl5E является мембранным белком, который способствует трансмембранным отросткам закрепляться в липидном бислое. Gp70 образует выступы, связывающие 15Е «реснички» бисульфидными связями.
Зависимость активации латентной инфекции от активности нейтрализующих антител, а также возможность латентного инфицирования вирусом лейкемии кошек без развития лейкоза у кошек, но с формированием выраженного иммунитета, явились основанием для разработки средств специфической профилактики.
Котят вакцинировали живым и инактивированным формалином вирус лейкемии кошек, выделенным из лимфобластоидной линии клеток FL74, а также инактивированными формалином клетками FL74. Линия клеток FL74 получена от кошки с Т-клеточным лейкозом. Она продуцирует подтипы А, В и С ВЛК и комплекс вирусного антигена, ассоциированного с мембранами клеток (FOSMA).
Инактивированные препараты не предотвращали заражения котят вирулентным вирусом, хотя снижали заболеваемость, несмотря на отсутствие нейтрализующих антител. Живая вакцина оказалась безопасной и эффективной. У половины вакцинированных котят вакцинный вирус обнаружен в костном мозге со 2-й по 4-ю неделю, но отсутствовал в периферической крови и не выделялся со слюной, мочой и калом. Он не передавался горизонтально невакцинированным котятам. В течение нескольких месяцев у вакцинированных котят не выявлено никаких нарушений, а в сыворотке крови обнаружен высокий уровень связанного с ВЛК мембранного антигена и ВН-антител. Вакцинированные котята оказались устойчивыми к заражению вирулентным штаммом вируса.
В другом исследовании вакцина, приготовленная из клеток FL74, обработанных формалином, защищала котят против виремии и образования опухолей. Оказалось, что для развития напряженного иммунитета необходимы три внутримышечные инъекции препарата. Ежегодная ревакцинация обеспечивала поддержание напряженного иммунитета.
Вакцинация кошек оболочечными гликопротеинами вируса лейкемии кошек (gp 70/85) сопровождалась образованием антител, выявляемых в ИФА, но не в реакции нейтрализации. При заражении вакцинированных котят ВЛК наблюдали персистентную вирусемию. Инактивированная цельновирионная вакцина имела более выраженное протективное действие при контрольном заражении котят ВЛК. Протективные свойства цельновирионной вакцины не были связаны с образованием ВН-антител, хотя вакцинация сопровождалась выработкой антител, выявляемых в ИФА, как против вирионов, так и их гликопротеинов. Следует отметить, что оба препарата обнаружили аналогичное, хотя и менее выраженное защитное действие при заражении вакцинированных котят вирусом саркомы кошек (ВСК). У котят, вакцинированных инактивированным цельновирионным препаратом, развивались опухоли меньшего размера, чем у контрольных, а персистентная виремия встречалась значительно реже. Субъединичная вакцина, приготовленная из клеток FL74 и содержащая, кроме gp 70, другие белки ВЛК, не обладала преимуществами по сравнению с гликопротеиновой вакциной.
Выраженный защитный иммунитет у кошек обеспечивал иммуностимулирующий комплекс (ИСКом), содержащий гликопротеин (gp 70/85) ВЛК, выделенный из клеток линии FL74. При заражении вакцинированных и контрольных котят ВЛК виремия развивалась только у непривитых животных.
Вакцинация кошек с последующей ревакцинацией через 2 и 11 недель субъединичной вакциной против ВЛК (Leucocell), включающей антигены подтипов А, В и С ВЛК, а также мембранный антиген (FOSMA) онкорнавируса кошек, защищает животных от развития инфекции при последующем заражении их вирулентным штаммом ВЛК. Спустя 2—4 года после вакцинации и заражения, еженедельная инъекция животным 7,5 мг/кг метилпреднизалона не вела к реактивации вируса в культуре клеток костного мозга, хотя и индуцировала снижение количества лимфоцитов в крови и антител к gp70 в сыворотке крови. Вакцина Leucocell предотвращала латентную инфекцию ВЛК даже на фоне иммуносупрессии. Она хорошо защищает кошек против персистентной виремии и возникновения опухолей. Компонентная вакцина Leucocell (фирма Норден, США), содержащая атигены ВЛК, выделенные из хронически инфицированной линии клеток FL74 (изолят Каваками), в отличие от живого аттенуированного штамма и инактивированного вирулентного штамма ВЛК, индуцирует иммунный ответ без иммуносупрессии. Вакцина защищает от установления латентной инфекции ВЛК при контакте с больными животными.
Вирус, продуцированный лимфобластоидной линией клеток FL74, обладал исключительно низкой инфекционностью и при использовании в качестве живой вакцины мог защитить вакцинированных кошек от заражения высокопатогенным штаммом ВЛК.
Некоторые инактивированные вакцины создавали иммунитет, защищающий от инфицирования. Сравнение нескольких инактивированных вакцин, приготовленных только из ВЛК-А или из трех субгрупп вируса, не выявило разницы между ними. Наиболее успешной была вакцинация, которая сопровождалась образованием ВНА, индуцированными главным образом gp70, и сопровождающаяся протективным иммунитетом. Трансформированные ВЛК клетки FL74 секретировали вирусные полипептиды, включая gpl7 и gp70. Иммуногенность инактивированных вакцин определялась концентрацией gp70 и его нативностью.
В последнее время разработаны два вида рекомбинантных вакцин, которые обеспечивают полную или почти полную защиту кошек от лейкоза. Один из полезных рекомбинантов получен клонированием гена gp70 FeLV-A в плазмидный вектор и экспрессированием в Е. coli MZ-1 под контролем промотора фага лямбда p1. Рекомбинант «gp70» кодировал целый обол очечный белок gp70 и первые 34 аминокислоты трансмембранного белка р15Е. В результате экспрессии образовывался негликозилированный белок 50 кД (р50), который накапливался в E.coli в виде нерастворимых телец включений. Белки (rgp70) растворяли и очищали в присутствии денатурирующих агентов и после добавления ГОА и сапонинового адъюванта (Q521) использовали в качестве вакцины. У кошек, иммунизированных 3 раза, независимо от способа введения развивались выраженный гуморальный иммунитет с образованием ВНА, анти-FOCMA (feline oncorna virus-associated cell membrane antigen) антител и защита от виремии после перитонеального заражения вирусом ЛК-А (105 БОЕ). Широкое применение субъединичной рекомбинантной вакцины в разных странах показало ее высокую эффективность. Она обеспечивала защиту около 100% кошек после двух вакцинаций с интервалом в 21 день. Такая вакцина в Европе получила название Leicogen®, а в США — GenetyVac™ и явилась первой генноинженерной ветеринарной вакциной, имеющей коммерческую ценность.
Эти вакцины практически ареактогенны и безопасны для кошек. Оказалось, что для создания протективного иммунитета антиген gp70 ВЛК может не иметь природную гликозилированную конформацию.
У большинства вакцинированных кошек отмечен низкий уровень ВНА перед заражением и высокий титр ненейтрализующих вирусспецифических антител. У кошек, устойчивых к виремии, через 4 недели после заражения образуются ВНА в высоком титре. Немедленное появление не нейтрализующих антител временно задерживает последующее образование ВНА. Развитие качественного иммунитета и удаление вируса, опосредованного СД8+ Т-клетками, наблюдается при острой инфекции. Использование адъюванта играет важную роль в развитии иммунитета. Неполный адьювант Фрейнда (EFA) оказал относительно слабое влияние на иммуногенность rgp70 для кошек, тогда как сапониновый адъювант QS-21 хорошо усиливал продукцию антител IgG2a, IgG2B и зависящий от Тх клеточный иммунитет.
Рекомбинантные векторные вакцины представляли собой полноразмерные env и gag гены ВЛК-А, клонированные в вирус оспы канареек в качестве вектора. Вирус размножался только в организме птиц, но вызывал полную экспрессию поверхностного гликопротеина и защиту кошек против персистентной вирусемии при двукратном введении 108 БОЕ. Применение векторных вакцин против ЛК показало, что: 1) защита не коррелирует с уровнем ВНА; 2) парентеральное введение рекомбинантной живой вакцины защищает от заражения на слизистые (ороназально); и 3) основную роль в иммунизации играет gp70, a gag ген, вероятно, играет хелперную роль.
IX Международная студенческая научная конференция Студенческий научный форум — 2017
ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ ЛЕЙКОЗА КОШЕК
Возбудителем инфекции является РНК-содержащий вирус семейства Retrovirinae, подсемейства Oncornavirinae, рода онковирусов, типа «С», вида онковирусов кошек.
Вирус лейкоза кошек широко распространен во всем мире, наибольшей плотностью преобладания вируса обладают регионы с большим количеством бродячих кошек или места со скученным содержанием животных (приюты и гостиницы для животных, в которых не соблюдаются санитарные нормы), которое способствует их многочисленным контактам. Распространено латентное (скрытое) вирусоносительство. Болеют кошки всех возрастов и пород, но люди и собаки влиянию этого вируса не подвержены. Он может выделяться со слюной, молоком, мочой и фекалиями. Наиболее частыми путями передачи инфекции являются заражение потомства от матери, а также половые контакты при вязке животных.
Вирус выделяется только инфицированными клетками в стадии митоза (деления). Этим объясняется тропизм (направление) ВЛК — он размножается в молодых быстро делящихся клетках (красном костном мозге, эпителии дыхательного и пищеварительного тракта). После проникновения в организм (оральным или аэрогенным путем) вирус реплицируется в заднеглоточных лимфатических узлах, из которых затем попадает в другие лимфоидные ткани и далее в красный костный мозг.
Вирусный лейкоз кошек довольно труден в диагностике, поскольку на начальном этапе клиническая картина может быть идентична большинству инфекций ЖКТ: потеря массы тела, вялость, отсутствие аппетита, анемия. При развитии лимфом, симптомы лейкоза у кошек становятся более разнообразными: при поражении кишечника-рвота, диарея, узелковые образования, видимые при УЗИ, как локальные утолщения кишечных петель, при поражении глаз — увеит и глаукома, при лимфоме легких- хилоторакс (накопление лимфы в грудной полости), при поражении спинного мозга возникает неврологическая симптоматика, проявляющаяся сначала шаткостью походки, а затем приводящая в некоторых случаях к параличу тазовых конечностей 13.
Диагностика
1. ПЦР (полимеразная цепная реакция)-диагностика по периферической крови. При виремии ВЛК подтверждается (выявление антигена), при латентном носительстверезультат, как правило, отрицательный.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА) – выявление не самого возбудителя, а продуктов его жизнедеятельности (маркеров).
3. Клинический анализ крови выявляет выраженную анемию, лейкоцитарный «сдвиг вправо», значительное повышение СОЭ.
4. Ложноотрицательные результаты по ПЦР и ИФА не являются редкостью, поэтому проводят повторные исследования, если клиническая картина соответствует заболеванию. Отрицательным ВЛК считается после двух отрицательных проб крови на ПЦР (ИФА) с интервалом в 12 недель.
5. Визуальная диагностика (УЗИ, рентгенография), позволяющая обнаружить лимфомы в кишечнике, легких или средостении. По результатам визуальной диагностики возможны дополнительные, более точные исследования: гастро- и колоноскопия, лапароскопия с последующим взятием биопсии тканей с пораженного участка.
Лечение: В настоящее время лечение данного заболевания плохо разработано. Рак, вызванный этими вирусами, неизлечим. Ранняя диагностика приносит облегчение, но полного выздоровления больного животного не происходит. Симптоматическое лечение включают антибиотики широкого спектра действия (пенициллин, ампициллин, ампиокс и др.), различные витамины и микроэлементы, а также противораковые препараты. Полезно переливание крови. При эффективном лечении кошки живут дольше, чем без терапии.
Больные кошки опасны для окружающих их здоровых кошек, так как активно выделяют вирус. При постановке диагноза на данное заболевание большинство ветеринарных врачей рекомендуют владельцам усыпить больное животное.
Профилактика: Данной инфекции должна включать вакцинацию кошек, своевременное распознавание заболевания и изоляцию всех вирусположительных кошек из питомников и мест их группового содержания. Имеющаяся FeLV-вакцина не так эффективна, как от бешенства, но необходима для защиты организма здоровых кошек от лейкемии.
Котята, рожденные от иммунизированных кошек, получают колостральный иммунитет с молозивом матери. Через 6-12 недель он ослабевает, и котята становятся восприимчивыми к заболеванию и нуждаются в прививке.
Перед первой прививкой всем котятам проводят ELISA-тест. Если результат отрицательный, то первая вакцинация проводится в 12 недель, а ревакцинация — через 2-3 недели. Последующие ревакцинации проводятся ежегодно.
Необходимо обрабатывать помещение для кошек и квартиру владельца обычными моющими или отбеливающими средствами. Вирус лейкемии кошек нестойкий, и его легко убить. Обязательно обрабатывают кошачьи потаенные места, которые могут быть испачканы испражнениями или слюной больного животного.
Данных об опасности FeLV-вируса для людей нет. Однако в лабораторных условиях вирус размножается в клетках человека. Теоретически к заболеванию склонны дети и люди с иммунодефицитом. Поэтому данные категории, как и беременные женщины, должны избегать контактов с вирусположительными кошками 24.
Заключение: в настоящее время разработанная схема лечения не является достаточно эффективной, и полного выздоровления не наступает. Это серьёзная проблема для ветеринарных специалистов и по сей день. Поэтому данная проблема является одной из ведущих проблем ветеринарной практики и требует повышенного внимания.
Библиографический список:
Биохимические и некоторые иммунологические показатели крови у собак, при лечении инфицированных ран сорбентами природного происхождения/В. А. Ермолаев, Е. М. Марьин, C. Н. Хохлова, О. Н. Марьина//Известия Оренбургского ГАУ. 2009. -№4.-С. 174-177.
Биохимический профиль крови у коров с язвенными процессами в области копытец / В.К. Якоб, Е.М. Марьин, П.М. Ляшенко, А.В. Сапожников, В.А. Ермолаев // В сборнике: Молодежь и наука XXI века. Материалы IV Международной научно-практической конференции. 2014. С. 152-161.
Ветеринарный клинический лексикон/ В.Н. Байматов, В.М. Мешков, А.П. Жуков, В.А. Ермолаев. – М.: КолосС, 2009. — 327 с.
Взаимосвязь между гемостазиологическими показателями при асептических и гнойных ранах у крупного рогатого скота / В.А.Ермолаев, В.И. Ермолаева //В сборнике: Фундаментальные и прикладные проблемы повышения продуктивности сельскохо-зяйственных животных. материалы международной научной конференции, посвящен-ной 70-летию профессора С.А. Лапшина. Министерство общего и профессионального образования Российской Федерации, Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева; ответственный редактор С.А. Лапшин. 1998. С. 112-114.
Влияние гидрофильных мазей на гемостазиологические показатели плазмы крови у телят с гнойными ранами / П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев // В сборнике: Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научно-практической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; Главный редактор А.В. Дозоров; ответственные редакторы: В.А. Исайчев, И.И. Богданов. 2013. С. 104-107.
Гулюкин, М. И. Вирус лейкоза кошек и его роль в патологии / М.И. Гулюкин, Н.А. Листкова // Ветеринария. — 2000. — № 4. — С. 18-22.
Динамика биохимических показателей крови при лечении гнойных кожно-мышечных ран у телят/И.С. Раксина, В.А.Ермолаев//Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.2012. № 1. С. 95.
Динамика изменения гемостазиологических показателей при лечении гнойных ран у телят/Е.Н. Никулина, В.А. Ермолаев, П.М. Ляшенко//Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2012. Т. 4. № 36-1. С. 78-79.
Динамика показателей белкового обмена крови у коров, больных гнойным пододерматитом / Е.М. Марьин, В.А. Ермолаев, О.Н. Марьина, В.В. Идогов // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 3 (23). С. 86-89.
Динамика показателей клинического анализа крови у ортопедически больных коров /В.А. Ермолаев, Е.М. Марьин, П.М. Ляшенко, А.В. Сапожников // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2016. № 10 (144). С. 116-122.
Ермолаев В.А. Гемостазиологические аспекты гнойной хирургической патологии крупного рогатого скота / В.А. Ермолаев // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии: Мат. междунар. научно-методической конф. ВГАУ. -Воронеж, 1997. –С. 67-68.
Ермолаев, В.А. Гематология: учебное пособие /В.А. Ермолаев, А.З. Мухитов. –Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2015. – 102 с.
Ермолаев, В.А. Гематология: учебное пособие /В.А. Ермолаев, Е.М. Марьин, А.В. Сапожников, П.М. Ляшенко, А.З. Мухитов, А.В. Киреев. –Ульяновск: Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина, 2016. – 135 с.
Ермолаев, В.А., Никулина Е.Н. Динамика морфологических показателей крови телят с гнойными ранами / В.А. Ермолаев, Е.Н. Никулина // Материалы Международной научно-практической конференции «Кадровое и научное обеспечение инновационного развития отрасли животноводства»// Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – Казань, 2010. – Т. 203. – С. 109-114.
Заживление инфицированных кожно-мышечных ран у собак под воздействием светодиодного излучения красного диапазона / А.В. Сапожников, В.А. Ермолаев, Е.М. Марьин, П.М. Ляшенко // В сборнике: Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы V Международной научно-практической конференции. Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия; Главный редактор А.В. Дозоров; ответственные редакторы: В.А. Исайчев, И.И. Богданов. 2013. С. 137-142.
Исследование клинических и гематологических показателей у коров с язвенными дефектами в области копытец / Е.М. Марьин, В.А. Ермолаев, В.К. Якоб, О.Н. Марьина // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. 2013. № 4 (24). С. 72-76.
Коррекция системы гемостаза при болезнях пальцев у крупного рогатого скота/ П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев, Е.М. Марьин // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2013. № 6 (44). С. 80-81.
Ляшенко, П.М. Влияние гидрофильных мазей на гемостазиологические показатели плазмы крови у телят с гнойными ранами/П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев//Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения Материалы V Международной научно-практической конференции. – Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013. -С. 104-107.
Методы исследования системы гемостаза в ветеринарии : Методические реко-мендации / В.А.Ермолаев, Б.С.Семенов, С.И. Лютинский. – Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия, 1998. – 37 с.
Минеральный обмен крови у коров, больных гнойным пододерматитом / Е.М. Марьин, В.А. Ермолаев, В.В. Идогов // Вестник Ульяновской государственной сель-скохозяйственной академии. 2016. № 1 (33). С. 111-114.
Никулина, Е.Н. Динамика гематологических показателей при лечении гнойных ран у телят / Е.Н. Никулина, П.М. Ляшенко, В.А. Ермолаев // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития: Материалы Международной научно-практической конференции. ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ». – Саратов: ИЦ «Наука», 2010. – С. 315-317.
Никулина, Е.Н. Динамика изменения гемостазиологических показателей при лечении гнойных ран у телят/ Е.Н. Никулина, В.А.Ермолаев, П.М.Ляшенко//Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2012. Т. 4. № 36-1. С. 78-79.
Регенерационные и дисрегенерационные процессы при лечении пододерматитов у коров / В.А. Ермолаев, Е.М. Марьин, П.М. Ляшенко, А.В. Сапожников // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2016. № 12 (146). С. 120-130.
Сапожников, А.В. Клинико-морфологические показатели крови при лечении ран светодиодным излучением красного диапазона/А.В. Сапожников, И.С. Сухина, В.А. Ермолаев//«Молодёжь и наука XXI века»: Материалы II Открытой Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных. -Ульяновск: УГСХА, 2007. -Часть 1. -С.148-151.
Состояние системы гемостаза, распространенность, этиология и некоторые иммуно-биохимические показатели крови у коров симментальской породы с болезнями копытец/ Е.М. Марьин, В.А. Ермолаев, П.М. Ляшенко, А.В. Сапожников, О.Н. Марьина// Научный вестник Технологического института — филиала ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина. 2013. № 12. С. 267-273.
Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьёв Б.В., Фомина Н.В.. Вирусные болезни животных/ В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. – М.: ВНИТИБП, 2001. -928 с.
