Диагностика хламидиоза свиней

В соответствии с руководством Д. Берджи, 9-е изд., (1993) возбудитель хламидиоза отнесён к царству Procariotae, отделу Gracilicutes, группе 9 Риккетсии и хламидии, порядку Chlamydiales, семейству Chlamydiaceae, роду Chlamydia в который входят следующие виды: Chl. trachomatis, Chl. psittaci, Chl. pneumoniae, Chl. pecorum. Chl. psittaci (болеют люди и птицы, у животных наблюдаются аборты и другая патология); Chl. pecorum (вызывает у животных аборты, полиартриты, энцефаломиелиты, кератоконъюнктивиты, пневмонии, энтериты и маститы); Chl. trachomatis (патогенны для человека, регистрируют трахому, лимфогранулему, цервицит, конъюнктивит); Сhl. pneumoniae (пневмонию и конъюнктивит человека).

Возбудитель неподвижен, спор и капсул не образует, грамотрицателен. В настоящее время разработано и предложено ряд методов окраски хламидий. Наиболее практически приемлемыми и употребляемыми являются методы окраски по Стампу, Маккиавелло, Романовкому-Гимзе.

Хламиидии имеют уникальный цикл развития. Они могут существовать в виде ретикулярных телец, которые не превышают в диаметре 1,2 мкм, а средний диаметр наиболее многочисленных и опасных в плане заражения промежуточных телец хламидий составляют 0,3 – 0,4 мкм, то есть размеры их соизмеримы с крупными вирусами. Самые высоко инфекционные формы хламидий (элементарные тельца) – это мелкие сферические клетки диаметром 0,25 – 0,3 мкм. Элементарные тельца являются внеклеточной формой существования, а ретикулярные (инициальные) тельца – внутриклеточной формой имеющие структуру типичных грамотрицательных бактерий.

Несмотря на то, что хламидии отнесены к царству Procariotae, особенности биологических свойств (культивирование на 6-7 дневных куриных эмбрионах, культуре клеток) приближают их к вирусам. В своем составе они содержат, ДНК и РНК (чем существенно отличаются от вирусов), около 40% липидов, 35% белка, соляную и фолиевую кислоты, имеют несколько автономных ферментных систем. Размножаясь в цитоплазме живых клеток они образуют мембранно-ограниченные цитоплазматические включения, состоящие из микроколоний (1-12 мкм в диаметре), которые распадаясь высвобождают сотни элементарных телец. Морфология хламидий зависит от цикла их развития, который слагается из следующих этапов:

1) адсорбция элементарных телец на оболочке клетки и их фагоцитоз;

2) трансформация элементарных телец в инициальные тельца;

3) деление ретикулярных телец с образованием промежуточных форм хламидий;

4) созревание промежуточных форм до элементарных телец.

Патогенные для свиней виды хламидий весьма аналогичны по морфологии, химической структуре, циклу развития, метаболизму и чувствительности к антибиотикам.

Из лабораторных животных к хламидиозу чувствительны морские свинки, кролики, белые мыши. Хорошей биологической моделью являются обезьяны.

Хламидии сравнительно устойчивы во внешней среде, хорошо сохраняются при низких температурах. В воде не теряют жизнеспособности до 17 дней, в лиофилизированном состоянии – до 3 лет, в не пастеризованном молоке – 23 дня. Возбудитель инактивируется дезсредствами в обычных концентрациях (2-3% раствор натрия гидроокиси, 3% раствор фенола, 2-3% раствор формальдегида и др.) Чувствителен к антибиотикам тетрациклинового ряда (геомицин ретард, террамицин, хлортетрациклин, окситетрациклин и другие). Трудности лечения больных свиней связаны с тем, что возбудитель является внутриклеточным облигатным паразитом и на определенных этапах инфекционного процесса становится недоступным для антибиотиков и других применяемых средств, поэтому курс лечения длительный и зачастую оказывается малоэффективным. Встречаются лекарственно-устойчивые L-формы возбудителя.

Хламидиозом болеют свиньи всех возрастов независимо от породы и пола. Источником возбудителя болезни являются больные и переболевшие животные, которые в течение 7-12 месяцев являются хламидионосителями и выделяют возбудителя с истечением из глаз, носа, с фекалиями, со спермой (хряки-производители), с мочой, молоком, с абортированном плодом, с околоплодными водами и оболочками, обсеменяя при этом все, что окружает животных. Заражение свиней происходит алиментарным, аэрогенным и половым путями. Хламидии легко преодолевают плацентарный барьер у супоросных свиноматок и инфицируют плоды (до 30%), в таком случае рождаются больные поросята (чаще с поражением желудочно-кишечного тракта, дыхательной системы и суставов).

Для хламидиоза характерна стационарность, которая объясняется длительным хламидионосительством, наличием резервуара возбудителя (мышевидные грызуны и многие дикие животные). Природная очаговость обусловлена тем, что хламидии циркулируют у рыб, растений, моллюсков вызывая различные патологические состояния.

Для хламидиозной инфекции свиней характерна также сезонность. Наибольшее количество абортов приходится на зимне-весенний период. В летнее время количество заболевших животных резко снижается и заболевание переходит в латентную форму. Зимой и весной с наступлением холодов, особенно на фоне нарушений условий содержания животных, инфекция активизируется, увеличивается количество абортов и мертворождений, болезнь проявляется клиническими признаками у различных возрастных групп свиней.

Заболеваемость и летальность среди поголовья свиней зависит от формы проявления болезни. При респираторной форме течения болезни, заболеваемость составляет до 60%, летальность до 30%, при кишечной соответственно 25 — 50% и 20 — 30%. При энцефалитной форме летальность составляет 100%. Заболеваемость и летальность может увеличиваться, если хламидиоз осложняется бактериальными и вирусными инфекциями.

Несмотря на высокую инфекционность хламидий, болезнь у свиней не всегда клинически проявляется. В большинстве случаев заражение приводит к инаппарантной, хронической инфекции и к длительному хламидионосительству.

Выяснено, что хламидии, поражающие животных обладают тканевым тропизмом, но не обладают хозяиноспецифичностью.

Инкубационный период — от нескольких часов до 3 — 4 месяцев.

Различают: респираторную, артритную, кишечную, генитальную, энцефаломиелитную и кератоконъюнктивальную формы хламидиоза.

Хламидиоз может протекать: остро, подостро и хронически.

У хряков хламидиоз протекает хронически. При этом наблюдают полиартриты, хромоту, чаще на одну из тазовых конечностей, увеличение семенников (орхит), надсеменниковых лимфоузлов, уретриты, искривление шеи за счет пареза отдельных групп мышц, поражение желудочно-кишечного и респираторного тракта.

Основным клиническим признаком у свиноматок являются аборты и мертворождения. Обычно аборты регистрируются у 30 — 50% разовых свинок. Введение в хозяйство здоровых ранее не болевших свиноматок и покрытие их больными хряками-производителями заканчивается абортами у большинства или у всех животных. У основных свиноматок наблюдается мертворождение (по 2 – 3, иногда 4 — 7) поросят, остальные поросята остаются живыми, но уже больными. Они погибают в течение 2 — 3 недель.

Поросята – сосуны, выжившие до месяца, растут и развиваются нормально. Однако после отъема, как правило, наблюдаются рецидивы заболевания. У поросят развивается бронхопневмония, поражается желудочно-кишечный тракт. Плохой аппетит, депрессия, сонливость, повышение температуры тела до 41 – 41,5 ° С, поносы, сухой кашель, отставание в росте – таковы основные клинические признаки болезни. У некоторых животных развиваются артриты. Поражаются скакательные, карпальные, пальцевые суставы – они увеличены, болезненны. Многие поросята страдают коньюнктивитом, нередко у них наблюдают поражение нижней части ушной раковины, развитие очаговых дерматитов, кольцевую гангрену хвоста и его отторжение. Зачастую на первое место выступают признаки поражения центральной нервной системы: дрожание кожи, волнообразное сокращение поверхностных мышц, парезы тазовых, реже грудных конечностей. Поросята могут внезапно падать, визжать, совершать плавательные движения, но также, неожиданно поднимаются и кажутся здоровыми.

При респираторнойформе наблюдается подъем температуры тела до 40 – 40,5°С. Наблюдается серозное или серозно-слизистое истечение из носовой полости, слезотечение, кашель, учащение дыхания. На 3-5-й день болезни появляется редкий сухой кашель и в легких прослушиваются хрипы. В крови отмечается лейкопения с нейтропенией. Симптомы респираторного заболевания у свиней вызванные хламидиями непостояны. Клиническое проявление болезни варьирует от латентного до тяжелой пневмонии с острым, подострым и хроническим течением. Как осложнение может быть выражен гепатит, нефрит, миокардит.

Наряду с поражением органов дыхания у некоторых животных может развиться артритная форма. При этом преимущественно поражаются скакательные суставы, реже воспалительный процесс распространяется на карпальные и пальцевые. Сутавы увеличены, болезненны. При затянувшемся хроническом процессе возможно образование свищей из суставной капсулы.

Кишечная форма заболевания характеризуется повышением температуры тела до 41°С, отсутствием аппетита, угнетением, учащением пульса и дыхания. Наиболее характерным признаком данной формы было расстройство деятельности желудочно-кишечного тракта. Затяжные поносы сопровождались тенезмами, в жидких каловых массах было много слизи с примесью крови. Больные животные заметно худели, у них западали глаза, а у некоторых отмечается серозно-слизистые истечения из носа и кашель. Временами этот симптомокомплекс несколько смягчается, а затем снова усиливается.

Генитальная форма характеризуется абортами у свиноматок, преждевременными опоросами, рождением мертвых и больных поросят. Ранние аборты могут происходить на втором месяце супоросности. Такие случаи проходят незамеченными и животное остается холостым. Свиноматки абортируют чаще в последние недели супоросности. Если опорос проходит в срок, то часть или все поросята рождаются мертвыми. Потери поросят могут достигать 70% от числа родившихся. У абортировавших животных наблюдаются маститы, эндометриты, задержание последа.

При энцефалитной форме первый признак болезни – внезапное повышение температуры тела до 40,5 — 42°С. Затем постепенно исчезает аппетит, наступает истощение и физическая слабость, наблюдается слезотечение и кашель, затем может наступить выздоровление животных. Но в большинстве случаев развивается симптомы нервного заболевания. Движения животных становятся не координированными. Конечности в путовых суставах непроизвольно сгибаются, суставы иногда бывают отечны, мягки и болезненны. У некоторых животных отчетливо проявляется хромота, наблюдается истечения из носа, у других – диарея. Больные животные обладают повышенной чувствительностью и иногда упираются головой в твердые предметы. Физическая слабость сопровождается прострацией и глубоким угнетением. В некоторых случаях незадолго до смерти отмечаются судорожные сокращения шейных и затылочных мышц. Кроме того, отмечается статическая и динамическая атаксия, дрожание головы, судороги верхних век, глаз ушей и губ.

Конъюнктивальная форма характеризуется односторонним конъюнктивитом. При этом из пораженного глаза появляются истечения, веки опухают, возникает сильная светобоязнь. На поверхности отечной слизистой оболочки видна мелкая зернистость. Воспалительный процесс может распространяться и на роговицу, вызывая кератит, а иногда и изъязвления ее. Через 8-10 дней животные выздоравливают.

Многообразие клинического проявления хламидиоза свидетельствует о том, что возбудитель поражает весь организм. Интенсивность и сочетаемость клинических признаков болезни зависит от возраста животного, иммунобиологического состояния организма, влияния факторов внешней среды.

Макро- и микроскопические изменения в органах и тканях при хламидиозе у свиней различных возрастных групп имеют свои особенности. Возбудитель заболевания, проявляя тропизм к репродуктивной системе, у супоросных свиноматок преодолевает плацентарный барьер, вызывает заболевание плодов, вследствие чего часть их погибает в утробе матери. Оставшиеся поросята рождаются живыми, но уже зараженными и больными.

У абортированных плодов и поросят-сосунов, погибших в первые дни жизни, наблюдается цианоз кожи в области пятачка, подгрудка, лобных костей, копытец и слизистой оболочки преддверия ротовой полости и конъюнктивы. У некоторых поросят месячного возраста в области ушей и корня хвоста обнаруживаются очаги некроза величиной около 2 см с последующим отторжением мертвой ткани. При вскрытии у них обнаруживается водянистый отек кожи и подкожной клетчатки в области затылка, подчелюстного пространства, промежности, грудных и тазовых конечностей. В подкожной клетчатке в области лобной и затылочной костей, кроме отека, просматриваются кровоизлияния. В грудной и брюшной полостях, перикардиальной сумке в большинстве случаев отмечается скопление транссудата соломенно-желтого цвета, иногда с красноватым оттенком, в легких, как у абортированных плодов, так и у павших поросят-сосунов – венозное полнокровие, часто сочетающееся с отеком. Могут наблюдаться признаки интерстициальная пневмонии или катаральной, катарально-гнойной бронхопневмонии. Кроме того, легкие у плодов находятся в состоянии фетально-тотального ателектаза.

В желудке и тонком отделе кишечника обнаруживается серозно-слизистый катар. Слизистая толстого отдела кишечника, в особенности ободочной кишки, чаще у плодов, в состоянии водянисто-студневидного отека. У отдельных плодов просвет толстых кишок заполнен красно-бурой массой студневидной консистенции. Печень в состоянии венозной гиперемии, под капсулой обнаруживаются белесовато-сероватые участки размером 1х1,5 см., не имеющие четко выраженных границ. В почках под капсулой видны точечные кровоизлияния, в мозговом слое на разрезе выражен венозный застой. Развивается зернистая, жировая дистрофия почек, печени и миокарда.

У 8 – 40-дневных поросят или убитых вначале заболевания наиболее сильно выраженные изменения обнаруживаются в сердце: на эпикарде, иногда на внутренней поверхности перикарда видны серо-желтые наложения фибрина. Одновременно может развиваться серозно-фибринозный перитонит.

У свиноматок, убитых в первые сутки после родов или аборта, слизистая оболочка рогов матки отечна и гиперемирована, шейка матки и влагалище местами геморрагически инфильтрированы. Наблюдается катарально-гнойный эндометрит, цервицит и вагинит. В регионарных лимфоузлах серозный лимфаденит. На плаценте возможны кровоизлияния и некрозы.

У хряков наблюдается увеличение семенников и надсеменниковых лимфоузлов в 1,5 — 2 раза, семяпроводы геморрагически воспалены. В предстательной железе, слизистой уретры и возле головки полового члена – кровоизлияния.

При гистологическом исследовании обнаруживают элементарные тель-ца и цитоплазматические включения в различных органах и тканях.

Диагностика хламидиоза базируется на проведении комплексных исследований и наблюдений. При постановке диагноза учитывают эпизоотологические данные, клиническую, патологоанатомическую картину, результаты гистологических исследований. Решающее значение имеет лабораторная диагностика болезни.

Диагностика хламидиоза включает:

1. Микроскопический метод — обнаружение хламидий в исследуемом материале с помощью световой и люминесцентной микроскопии (флуорохромирование), а также иммунофлуоресценцией);

2. Метод выделения и культивирования хламидий на куриных эмбрионах, культуре клеток, в организме восприимчивых животных с последующей идентификацией возбудителя;

3. Серологический метод — выявление нарастание титра антител в парных пробах сыворотки больных или переболевших животных в: РСК (реакция связывания комплемента), РДСК (реакция длительного связывания комплемента), РНСК (реакция непрямого связывания комплемента), РНГА (реакция непрямой гемагглютинации), ИФА (иммуноферментный анализ);

4. Молекулярно-генетический метод идентификации хламидий – ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностика микроскопическим, серологическим и молекулярно-генетическим методами проводится согласно инструкциям по применению соответствующих диагностикумов и тест-систем.